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Determinar el número de copias de una plantilla de ADN bicatenario ya sea ADN genómico, plásmido o un fragmento amplificado es esencial para muchas aplicaciones de cuantificación genética en entornos de investigación y diagnóstico. Al preparar estándares para una curva estándar, por ejemplo, saberla cantidad de copias que tiene en su reserva de ADN es esencial para poder calcular una serie de diluciones.

Esto se puede lograr fácilmente con una calculadora de número de copias, todo lo que necesita saber es la concentración de ADN en su muestra en ng / µl y la longitud de su plantilla en pares de bases. La concentración de ADN en la muestra normalmente se determinautilizando una herramienta de cuantificación basada en fluorometría o espectrofotometría.

La siguiente ecuación se utiliza para determinar el número de copias de la plantilla de ADN los valores en verde los proporciona el usuario. Los cálculos se realizan basándose en la suposición de que el peso molecular medio de un par de bases pb es 650 Daltons.

Número de copias de la plantilla de ADN por µl = concentración de ADN ng / µl x número de Avogadro / longitud de la plantilla pb x factor de conversión a ng x peso promedio de un par de bases Da

Número de copias = concentración de ADN ng / µl x [6.022 x 10 23 ] / longitud de la plantilla pb x [1x10 9 ] x 650

Tengo una muestra de stock de ADN genómico que tiene una concentración de 45 ng / µl y el tamaño del genoma es de 2.300.678 pb. ¿Cuántas copias del genoma hay en 1 µl de este stock?

Número de copias = 45 x [6,022 x 10 23 ] / 2300678 x [1x10 9 ] x 650
= 2,7099 x 10 25 / 1.4954407 x 10 18
= 18121079,6256 copias / µl
= 1,81 x 10 7 copias / µl

NOTA: Complete los dos valores para calcular el número de copias de su plantilla de ADN. Haga clic aquí para obtener más información sobre la calculadora de número de copias.


pb
ng / μ L
por μ L