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Método de preparación de muestras simplificado desarrollado para pruebas de SARS-CoV-2

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Método de preparación de muestras simplificado desarrollado para pruebas de SARS-CoV-2

Crédito: Pixabay
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Los científicos de los Institutos Nacionales de Salud NIH han desarrollado un nuevo método de preparación de muestras para detectar el SARS-Cov-2, el virus que causa el COVID-19. El método evita la extracción del material de ARN genético del virus, lo que simplifica la purificación de la muestray potencialmente reducir el tiempo y el costo de la prueba. El método es el resultado de una colaboración entre investigadores del National Eye Institute NEI, el NIH Clinical Center CC y el National Institute of Dental and Craniofacial Research NIDCR.

Las pruebas de diagnóstico siguen siendo una herramienta crucial en la lucha contra la pandemia COVID-19. Las pruebas estándar para la detección del SARS-CoV-2 implican amplificar el ARN viral a niveles detectables mediante una técnica llamada PCR cuantitativa de transcripción inversa RT-qPCR. PeroEn primer lugar, se debe extraer el ARN de la muestra. Los fabricantes de kits de extracción de ARN han tenido dificultades para satisfacer la demanda durante la pandemia COVID-19, lo que ha obstaculizado la capacidad de prueba en todo el mundo. Con la aparición de nuevas variantes de virus, la necesidad de pruebas mejores y más rápidas es mayorque nunca.

Un equipo dirigido por Robert B. Hufnagel, MD, Ph.D., jefe de la Unidad de Genética Médica y Genómica Oftalmológica de NEI, y Bin Guan, Ph.D., miembro del Laboratorio de Genómica Oftalmológica de NEI, utilizó unagente quelante fabricado por la empresa de suministros de laboratorio Bio-Rad llamado resina Chelex 100 para preservar el ARN del SARS-CoV-2 en muestras para su detección mediante RT-qPCR.

“Usamos muestras nasofaríngeas y de saliva con varias concentraciones de virión para evaluar si podrían usarse para la detección directa de ARN”, dijo Guan, autor principal de un informe sobre la técnica, que se publicó esta semana en iScience . "La respuesta fue sí, con una sensibilidad notablemente alta. Además, esta preparación inactivó el virus, lo que hizo más seguro para el personal de laboratorio manipular muestras positivas".

El equipo de Hufnagel hizo su descubrimiento probando una variedad de productos químicos utilizando muestras sintéticas y humanas para identificar aquellos que podrían preservar el ARN en muestras con una degradación mínima al tiempo que permiten la detección directa del virus mediante RT-qPCR.

Para validar la prueba, Blake M. Warner, DDS, Ph.D., MPH del NIDCR y su equipo recolectaron muestras de pacientes en el Protocolo de Investigación NIH IRB 20-D-0094 y las almacenaron en un medio de transporte viral oel tampón de resina quelante recientemente desarrollado en la Instalación de Pruebas Sintomáticas de los NIH.

Las muestras en medios de transporte viral fueron analizadas por el equipo de pruebas de COVID-19 en el Centro Clínico de los NIH, dirigido por Karen M. Frank, MD, Ph.D., utilizando extracción de ARN convencional y pruebas de RT-qPCR. Las muestras en elEl tampón de resina quelante se calentó y el ARN viral se probó por RT-qPCR. La nueva preparación aumentó significativamente el rendimiento de ARN disponible para la prueba, en comparación con el método estándar.

"Creemos que esta metodología novedosa tiene claros beneficios de aumentar la sensibilidad, el ahorro de costos y tiempo para las pruebas", dijo Hufnagel, "El método estabiliza el ARN a temperatura ambiente para facilitar el transporte, el almacenamiento y la manipulación en entornos clínicos".

Referencia : Guan B, Frank KM, Maldonado JO, et al. Detección del virus del ARN del SARS-CoV-2 sin extracción sensible utilizando una resina quelante. iScience . 2021: 102960. Doi: 10.1016 / j.isci.2021.102960

Este artículo se ha vuelto a publicar a partir de lo siguiente materiales. Nota: el material puede haber sido editado por su extensión y contenido. Para obtener más información, comuníquese con la fuente citada.


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