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Espectroscopía UV-Vis: principio, fortalezas y limitaciones y aplicaciones

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Espectroscopía UV-Vis: principio, fortalezas y limitaciones y aplicaciones

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La espectroscopia ultravioleta-visible UV-Vis es una técnica ampliamente utilizada en muchas áreas de la ciencia que van desde el cultivo bacteriano, la identificación de fármacos y las comprobaciones y cuantificación de la pureza del ácido nucleico, hasta el control de calidad en la industria de bebidas y la investigación química. Este artículodescribir cómo funciona la espectroscopía UV-Vis, cómo analizar los datos de salida, las fortalezas y limitaciones de la técnica y algunas de sus aplicaciones.

¿Qué es la espectroscopia UV-Vis?


La espectroscopia UV-Vis es una técnica analítica que mide la cantidad de longitudes de onda discretas de luz UV o visible que son absorbidas o transmitidas a través de una muestra en comparación con una muestra de referencia o en blanco. Esta propiedad está influenciada por la composición de la muestra, potencialmenteproporcionando información sobre lo que hay en la muestra y en qué concentración. Dado que esta técnica de espectroscopia se basa en el uso de la luz, consideremos primero las propiedades de la luz.

La luz tiene una cierta cantidad de energía que es inversamente proporcional a su longitud de onda. Por lo tanto, las longitudes de onda más cortas de la luz transportan más energía y las longitudes de onda más largas transportan menos energía. Se necesita una cantidad específica de energía para promover los electrones en una sustancia a una energía más altaestado que podemos detectar como absorción. Los electrones en diferentes entornos de enlace en una sustancia requieren una cantidad específica diferente de energía para promover los electrones a un estado de energía más alto. Es por eso que la absorción de luz ocurre para diferentes longitudes de onda en diferentes sustancias. Los seres humanos soncapaz de ver un espectro de luz visible, desde aproximadamente 380 nm, que vemos como violeta, hasta 780 nm, que vemos como rojo. 1 La luz ultravioleta tiene longitudes de onda más cortas que la luz visible hasta aproximadamente 100 nm. Por lo tanto, la luz puede describirse por su longitud de onda, que puede ser útil en espectroscopía UV-Vis para analizar o identificar diferentes sustancias localizando las longitudes de onda específicas correspondientes al máximo.absorbancia consulte la sección Aplicaciones de la espectroscopia UV-Vis.


¿Cómo funciona un espectrofotómetro UV-Vis?


Si bien existen muchas variaciones en el espectrofotómetro UV-Vis, para comprender mejor cómo funciona un espectrofotómetro UV-Vis, consideremos los componentes principales, que se muestran en la Figura 1.


Figura 1 :
Un esquema simplificado de los componentes principales de un espectrofotómetro UV-Vis. Crédito: Dr. Justin Tom.


fuente de luz


Como técnica basada en la luz, es esencial una fuente estable capaz de emitir luz en una amplia gama de longitudes de onda. Una sola lámpara de xenón se usa comúnmente como fuente de luz de alta intensidad para los rangos UV y visible. Sin embargo, las lámparas de xenón son, asociados con costos más altos y son menos estables en comparación con las lámparas de tungsteno y halógenas.


Para instrumentos que emplean dos lámparas, se usa comúnmente una lámpara de tungsteno o halógena para luz visible
2 mientras que una lámpara de deuterio es la fuente común de luz ultravioleta. 2 Como se necesitan dos fuentes de luz diferentes para escanear las longitudes de onda UV y visible, la fuente de luz en el instrumento debe cambiar durante la medición. En la práctica, este cambio ocurre típicamente durante el escaneo entre 300 y 350 nm donde la emisión de luz es similarde ambas fuentes de luz y la transición se puede hacer más suavemente.


selección de longitud de onda


En el siguiente paso, se deben seleccionar ciertas longitudes de onda de luz adecuadas para el tipo de muestra y el analito para la detección para el examen de la muestra a partir de las amplias longitudes de onda emitidas por la fuente de luz. Los métodos disponibles para esto incluyen :

- monocromadores
Un monocromador separa la luz en una banda estrecha de longitudes de onda. La mayoría de las veces se basa en rejillas de difracción que se pueden girar para elegir ángulos entrantes y reflejados para seleccionar la longitud de onda de luz deseada. 1, 2 La frecuencia de surco de la rejilla de difracción a menudo se mide como el número de surcos por mm. Una frecuencia de surco más alta proporciona una mejor resolución óptica pero un rango de longitud de onda utilizable más estrecho. Una frecuencia de surco más baja proporciona un rango de longitud de onda utilizable más grande pero una peor resolución óptica.De 300 a 2000 ranuras por mm se pueden utilizar con fines de espectroscopía UV Vis, pero es típico un mínimo de 1200 ranuras por mm. La calidad de las mediciones espectroscópicas es sensible a las imperfecciones físicas en la rejilla de difracción y en la configuración óptica.Las rejillas de difracción tienden a tener más defectos que las rejillas de difracción holográfica flameadas. 3 Las rejillas de difracción holográfica flameadas tienden a proporcionar mediciones de calidad significativamente mejor. 3

-
filtros de absorción
Los filtros de absorción generalmente están hechos de vidrio de color o plástico diseñado para absorber longitudes de onda de luz particulares. 2

-
filtros de interferencia
También llamados filtros dicroicos, estos filtros de uso común están hechos de muchas capas de material dieléctrico donde se produce la interferencia entre las capas delgadas de materiales. Estos filtros se pueden usar para eliminar longitudes de onda indeseables por interferencia destructiva, actuando así como un selector de longitud de onda. 1, 2

-
filtros de corte
Los filtros de corte permiten que pase la luz por debajo paso corto o por encima paso largo de una determinada longitud de onda. Estos se implementan comúnmente mediante filtros de interferencia.

-
filtros de paso de banda
Los filtros de paso de banda permiten el paso de una variedad de longitudes de onda que se pueden implementar combinando filtros de paso corto y paso largo.

Los monocromadores se usan más comúnmente para este proceso debido a su versatilidad. Sin embargo, los filtros se usan a menudo junto con los monocromadores para reducir aún más las longitudes de onda de la luz seleccionada para obtener mediciones más precisas y mejorar la relación señal / ruido.

análisis de muestra


Cualquiera que sea el selector de longitud de onda que se utilice en el espectrofotómetro, la luz pasa a través de una muestra. Para todos los análisis, medir una muestra de referencia, a menudo denominada "muestra en blanco", como una cubeta llena con un disolvente similar que se utiliza para prepararla muestra, es imperativo. Si se usa una solución tamponada acuosa que contiene la muestra para las mediciones, entonces la solución tamponada acuosa sin la sustancia de interés se usa como referencia. Al examinar cultivos bacterianos, los medios de cultivo estériles se usarían como referenciaPosteriormente, el instrumento utiliza automáticamente la señal de la muestra de referencia para ayudar a obtener los valores reales de absorbancia de los analitos.


Es importante conocer los materiales y las condiciones que se utilizan en los experimentos de espectroscopia UV-Vis. Por ejemplo, la mayoría de las cubetas de plástico son inapropiadas para los estudios de absorción de UV porque el plástico generalmente absorbe la luz UV. El vidrio puede actuar como filtro, a menudoabsorbiendo la mayor parte de UVC 100‑280 nm
2 y UVB 280‑315 nm 2 pero permitiendo algo de UVA 315‑400 nm 2 para pasar. Por lo tanto, se requieren portamuestras de cuarzo para el examen UV porque el cuarzo es transparente a la mayoría de la luz ultravioleta. El aire también puede considerarse un filtro porque las longitudes de onda de la luz inferiores a 200 nm son absorbidas por el oxígeno molecularSe requiere una configuración especial y más costosa para mediciones con longitudes de onda inferiores a 200 nm, que generalmente implican un sistema óptico lleno de gas argón puro. También hay disponibles sistemas sin cubeta que permiten el análisis de volúmenes de muestra muy pequeños, paraejemplo en análisis de ADN o ARN.


detección


Una vez que la luz ha pasado a través de la muestra, se utiliza un detector para convertir la luz en una señal electrónica legible. Generalmente, los detectores se basan en recubrimientos fotoeléctricos o semiconductores.


A revestimiento fotoeléctrico expulsa electrones cargados negativamente cuando se expone a la luz. Cuando se expulsan electrones, se genera una corriente eléctrica proporcional a la intensidad de la luz. Un tubo fotomultiplicador PMT
4 es uno de los detectores más comunes que se utilizan en la espectroscopia UV-Vis. 2 , 5 Una PMT se basa en el efecto fotoeléctrico para expulsar inicialmente electrones al exponerse a la luz, seguido de la multiplicación secuencial de los electrones expulsados ​​para generar una corriente eléctrica más grande. 4 Los detectores PMT son especialmente útiles para detectar niveles de luz muy bajos.


cuando semiconductores están expuestos a la luz, puede atravesar una corriente eléctrica proporcional a la intensidad de la luz. Más específicamente, fotodiodos
6 y dispositivos de carga acoplada CCD 7 son dos de los detectores más comunes basados ​​en tecnología de semiconductores. 2 , 5


Después de que se genera la corriente eléctrica a partir del detector que se utilizó, la señal se reconoce y se envía a una computadora o pantalla. Las figuras 2 y 3 muestran algunos diagramas esquemáticos de ejemplo simplificados de disposiciones de espectrofotómetro UV-Vis.


Figura 2 :
Diagrama esquemático de un sistema de espectroscopia UV-Vis basado en cubetas.


Figura 3 :
Diagrama esquemático de un sistema de espectroscopia UV-Vis sin cubeta. 8


análisis de espectroscopia UV-Vis, espectro de absorción y unidades de absorbancia


la información de espectroscopía UV-Vis puede presentarse como un gráfico de absorbancia, densidad óptica o transmitancia en función de la longitud de onda. Sin embargo, la información se presenta más a menudo como un gráfico de absorbancia en la vertical y eje y longitud de onda en la horizontal x eje. Este gráfico se suele denominar espectro de absorción; en la Figura 4 se muestra un ejemplo.


Figura 4 :
Un ejemplo de espectro de absorción tomado de un espectrofotómetro UV-Vis. La muestra examinada era hemoglobina expirada disuelta en tampón fosfato de pH neutro. Crédito: Dr. Justin Tom.


Según la instrumentación del espectrofotómetro UV-Vis revisada en la sección anterior de este artículo, se puede esperar razonablemente que la intensidad de la luz esté relacionada cuantitativamente con la cantidad de luz absorbida por la muestra.


La absorbancia A es igual al logaritmo de una fracción que involucra la intensidad de la luz antes de pasar a través de la muestra I o dividido por la intensidad de la luz después de pasar por la muestra I .La fracción I dividido por I o también se llama transmitancia T , que expresa cuánta luz ha pasado a través de una muestra.Sin embargo, la ley de Beer-Lambert se aplica a menudo para obtener la concentración de la muestra c después de medir la absorbancia A cuando la absortividad molar ε y la longitud de la ruta L son conocidos.Normalmente, ε se expresa en unidades de L mol -1 cm -1 , L tiene unidades de cm y c se expresa en unidades de mol L -1 . Como consecuencia, A no tiene unidades.


A veces, AU se usa para indicar unidades arbitrarias o unidades de absorbancia, pero esto se ha desaconsejado enérgicamente.


La ley de Beer-Lambert es especialmente útil para obtener la concentración de una sustancia si existe una relación lineal usando un conjunto medido de soluciones estándar que contienen la misma sustancia. La ecuación 1 muestra las relaciones matemáticas entre la absorbancia, la ley de Beer-Lambert, las intensidades de luzmedido en el instrumento y transmitancia.
5 , 9


Ecuación 1 :
Un conjunto de ecuaciones que muestran las relaciones entre absorbancia A , ley de Beer-Lambert, las intensidades de luz medidas en el instrumento y transmitancia.


El término densidad óptica DO a veces se usa incorrectamente de manera intercambiable con absorbancia. La DO y la absorbancia miden la cantidad de intensidad de luz perdida en un componente óptico, pero la DO toma en consideración la pérdida por dispersión de luz, mientras que la absorbancia no lo hace. Si es muy pequeñaSi hay dispersión de luz en una medición, entonces la DO se puede aproximar directamente usando la absorbancia y se puede usar la ley de Beer-Lambert.


Es importante conocer las condiciones experimentales durante las mediciones. Las cubetas diseñadas para una longitud de trayectoria de 1 cm son estándar y son las más comunes. A veces, hay muy poca muestra disponible para el examen y se necesitan longitudes de trayectoria más cortas de tan solo 1 mm.requerido, los valores de absorbancia deben mantenerse por debajo de 1, dentro del rango dinámico del instrumento. Esto se debe a que una absorbancia de 1 implica que la muestra absorbió el 90% de la luz entrante, o lo que equivale a decir que el 10% de la luz entrante se transmitió a través deCon tan poca luz que llega al detector, algunos espectrofotómetros UV-Vis no son lo suficientemente sensibles como para cuantificar pequeñas cantidades de luz de manera confiable. Dos posibles soluciones simples a este problema son diluir la muestra o disminuir la longitud del camino.

Como se mencionó anteriormente, registrar un espectro de línea de base usando una solución de referencia "en blanco" es esencial. Si el instrumento fuera absolutamente perfecto en todos los sentidos, la línea de base tendría absorbancia cero para cada longitud de onda examinada. En una situación real, sin embargo, la línea de basePor lo general, el espectro tendrá algunos valores de absorbancia positivos y negativos muy pequeños. Para la mejor práctica, estos pequeños valores de absorbancia a menudo se restan automáticamente de los valores de absorbancia de la muestra para cada longitud de onda de luz mediante el software para obtener los valores de absorbancia verdaderos. 1


Dependiendo del propósito del análisis, la construcción de una curva de calibración puede ser deseable. La construcción de una curva de calibración requiere un poco de análisis de datos y trabajo adicional, pero es muy útil para determinar la concentración de una sustancia en particular con precisión en una muestra basada enmediciones de absorbancia. Sin embargo, existen numerosas circunstancias en las que no es necesaria una curva de calibración, incluidas las mediciones de DO para el cultivo bacteriano, la toma de relaciones de absorbancia en longitudes de onda específicas para evaluar la pureza de los ácidos nucleicos o identificar ciertos productos farmacéuticos.


En la espectroscopia UV-Vis, se elige para el análisis la longitud de onda correspondiente a la absorbancia máxima de la sustancia objetivo. Esta elección asegura la máxima sensibilidad porque la mayor respuesta se obtiene para una determinada concentración de analito. 1 En la Figura 5 se proporciona un ejemplo de un espectro de absorción UV Vis de Food Green 3 y una curva de calibración correspondiente utilizando soluciones estándar. Tenga en cuenta que hay dos picos de absorbancia máxima presentes en el colorante Food Green 3, un pico de absorbancia máxima más pequeño a 435nm y un pico de absorbancia máxima más intenso a 619 nm. Para obtener la máxima sensibilidad al calcular una concentración desconocida de Food Green 3, se utilizó el pico de absorbancia máximo a 619 nm para el análisis. Se prepararon soluciones estándar en un rango de concentraciones conocidas diluyendouna solución madre, tomando medidas de absorbancia y luego trazándolas en un gráfico de absorbancia versus concentración para construir una relación numérica entre concentración y absorbancia. Se creó una curva de calibración usando una ecuación de regresión lineal de mínimos cuadrados. Cuanto más cerca estén los puntos de datos de unalínea, mejor será el ajuste. La intersección con el eje y en la ecuación de línea recta se estableció en cero para indicar que no hay absorbancia cuando no hay tinteregalo.La ecuación que se muestra en la Figura 5 se utiliza para calcular la concentración de Food Green 3 variable x en una muestra desconocida en función de la absorbancia medida variable y.


Figura 5 :
En el gráfico de la izquierda se muestra un espectro UV-Vis de Food Green 3 extraído de una muestra. La curva de calibración que se muestra en el gráfico de la derecha se desarrolló a partir de soluciones diluidas estándar de Food Green 3 utilizando una ecuación de regresión lineal de mínimos cuadrados. Crédito: Dr. Justin Tom.


Para el análisis de datos, el gráfico de absorbancia versus concentración puede indicar qué tan sensible es el sistema al construir una curva de calibración. Cuando se usa una ecuación de regresión de mínimos cuadrados lineal, la pendiente de la línea de mejor ajuste indica sensibilidad. Si la pendiente esmás pronunciada, la sensibilidad es mayor. La sensibilidad es la capacidad de diferenciar entre las pequeñas diferencias en la concentración de la muestra. Según la ley de Beer-Lambert, la sensibilidad puede estar parcialmente indicada por la absortividad molar ε . Conociendo el ε los valores de antemano, si están disponibles, pueden ayudar a determinar las concentraciones de las muestras requeridas, particularmente cuando las muestras son limitadas o caras.


Para mayor confiabilidad y mejores prácticas, los experimentos y lecturas de espectroscopía UV-Vis deben repetirse. Cuando se repite el examen de una muestra, en general, es común un mínimo de tres ensayos repetidos, pero se requieren muchas más repeticiones en ciertos campos de trabajo. Una cantidad calculada, como la concentración de una muestra desconocida, generalmente se informa como un promedio con una desviación estándar. Los resultados reproducibles son esenciales para garantizar mediciones precisas y de alta calidad. La desviación estándar, la desviación estándar relativa o el coeficiente de variación ayudanpara determinar qué tan precisos son el sistema y las mediciones. Una desviación o variación baja indica un mayor nivel de precisión y confiabilidad.


Fortalezas y limitaciones de la espectroscopia UV-Vis


Ninguna técnica es perfecta y la espectroscopia UV-Vis no es una excepción. Sin embargo, la técnica tiene algunas fortalezas principales que se enumeran a continuación que la hacen popular.


-
La técnica es no destructivo , lo que permite reutilizar la muestra o continuar con su procesamiento o análisis.

- Se pueden realizar mediciones rápidamente , lo que permite una fácil integración en protocolos experimentales.

- Los instrumentos son fácil de usar , requiere poca capacitación del usuario antes de su uso.

- el análisis de datos generalmente requiere procesamiento mínimo , lo que nuevamente significa que se requiere poca capacitación del usuario.

- el instrumento es generalmente económico para adquirir y operar, haciéndolo accesible para muchos laboratorios.


Aunque las fortalezas de esta técnica parecen abrumadoras, también hay ciertas debilidades :


- luz parásita
En un instrumento real, los selectores de longitud de onda no son perfectos y una pequeña cantidad de luz de un amplio rango de longitud de onda aún puede transmitirse desde la fuente de luz 1 posiblemente causando errores de medición graves. 9 La luz parásita también puede provenir del entorno o de un compartimento suelto del instrumento. 1

- Dispersión de luz
la dispersión de la luz es a menudo causado por sólidos en suspensión en muestras líquidas, que pueden causar errores de medición graves. La presencia de burbujas en la cubeta o muestra dispersará la luz, lo que dará como resultado resultados irreproducibles.

- Interferencia de múltiples especies absorbentes
Una muestra puede, por ejemplo, tener varios tipos de clorofila de pigmento verde. Las diferentes clorofilas tendrán espectros superpuestos cuando se examinen juntas en la misma muestra. Para un análisis cuantitativo adecuado, cada especie química debe separarse de la muestra y examinarseindividualmente.

- consideraciones geométricas
La posición desalineada de cualquiera de los componentes del instrumento, especialmente la cubeta que contiene la muestra, puede producir resultados irreproducibles e inexactos. Por lo tanto, es importante que todos los componentes del instrumento estén alineados en la misma orientación y en la misma posiciónpara cada medición. Por lo tanto, generalmente se recomienda cierta capacitación básica del usuario para evitar un uso indebido.

Aplicaciones de la espectroscopia UV-Vis


UV-Vis se ha aplicado a muchos usos y situaciones, incluidos, entre otros, :


análisis de ADN y ARN


La verificación rápida de la pureza y concentración de ARN y ADN es una aplicación particularmente extendida. En la Tabla 1 se ofrece un resumen de las longitudes de onda utilizadas en su análisis y lo que indican. Al preparar muestras de ADN o ARN, por ejemplo, para aplicaciones posteriores comocomo secuenciación, a menudo es importante verificar que no haya contaminación de uno con el otro, o con proteínas o sustancias químicas arrastradas desde el proceso de aislamiento.


La relación de absorbancia de 260 nm / 280 nm 260/280 es útil para revelar una posible contaminación en muestras de ácido nucleico, resumida en la Tabla 2. El ADN puro generalmente tiene una proporción de 260/280 de 1.8, mientras que la proporción de ARN puro suele ser 2.0. El ADN puro tiene una proporción de 260/280 más baja que el ARN porque la timina, que es reemplazada por uracilo en el ARN, tiene una proporción de 260/280 más baja que la del ARN./ 280 que el uracilo. Las muestras contaminadas con proteínas reducirán la relación 260/280 debido a una mayor absorbancia a 280 nm.


longitud de onda utilizada en el análisis de absorbancia

en nanómetros

¿Qué indica la presencia de la absorbancia UV a esta longitud de onda?

¿Qué causa la absorbancia UV en esta longitud de onda?

230

proteína

forma de proteína 10

260

ADN y ARN

adenina, guanina, citosina, timina, uracilo

280

proteína

principalmente triptófano y tirosina


Tabla 1 :
Resumen de la absorbancia UV útil al determinar las relaciones de absorbancia 260/280 y 260/230.

relación de absorbancia

valores típicos

260/280

relación de absorbancia 1,8 típica para ADN puro

relación de absorbancia de 2,0 típica para ARN puro

260/230

La relación de absorbancia varía; 2,15 a 2,50 típico para ARN y ADN 11


Tabla 2 : Resumen de las relaciones esperadas de absorbancia UV para el análisis de ADN y ARN.


La relación de absorbancia de 260 nm / 230 nm 260/230 también es útil para comprobar la pureza de las muestras de ADN y ARN y puede revelar contaminación proteica o química. Las proteínas pueden absorber luz a 230 nm, lo que reduce la relación 260/230e indica contaminación de proteínas en muestras de ADN y ARN.
10 El tiocianato de guanidinio y el isotiocianato de guanidinio, dos de los compuestos comunes utilizados en la purificación de ácidos nucleicos, absorben fuertemente a 230 nm, lo que también reducirá la relación de absorbancia de 260/230.


análisis farmacéutico


Uno de los usos más comunes de la espectroscopia UV-Vis es en la industria farmacéutica.
12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 En particular, el procesamiento de espectros UV-Vis utilizando derivados matemáticos permite que los picos de absorbancia superpuestos en los espectros originales se resuelvan para identificar compuestos farmacéuticos individuales. 12 , 17 Por ejemplo, benzocaína, un anestésico local, y clortetraciclina, un antibiótico, se pueden identificar simultáneamente en formulaciones comerciales de polvo veterinario aplicando el primer derivado matemático a los espectros de absorbancia. 17 La cuantificación simultánea de ambas sustancias fue posible en un rango de concentración de microgramos por mililitro mediante la construcción de una función de calibración para cada compuesto. 17


cultivo bacteriano


la espectroscopia UV-Vis se usa a menudo en cultivo bacteriano . Las mediciones de DO se toman de forma rápida y rutinaria utilizando una longitud de onda de 600 nm para estimar la concentración celular y realizar un seguimiento del crecimiento.
18 600 nm se usa comúnmente y se prefiere debido a las propiedades ópticas de los medios de cultivo bacterianos en los que se cultivan y para evitar dañar las células en los casos en que se requieran para la experimentación continua.


análisis de bebidas


La identificación de compuestos particulares en bebidas es otra aplicación común de la espectroscopia UV Vis. El contenido de cafeína debe estar dentro de ciertos límites legales. 1, 19 para los cuales la luz ultravioleta puede facilitar la cuantificación. Ciertas clases de sustancias coloreadas, como la antocianina que se encuentra en los arándanos, frambuesas, moras y cerezas, se identifican fácilmente al hacer coincidir sus longitudes de onda de absorbancia máxima conocidas en el vino para el control de calidad utilizando la absorbancia UV Vis. 20

otras aplicaciones


Esta técnica también se puede usar en muchas otras industrias. Por ejemplo, medir un índice de color es útil para monitorear el aceite del transformador como medida preventiva para garantizar que la energía eléctrica se entregue de manera segura.
21 La medición de la absorbancia de la hemoglobina para determinar las concentraciones de hemoglobina puede usarse en la investigación del cáncer. 22 En el tratamiento de aguas residuales, la espectroscopia UV-Vis se puede utilizar en estudios cinéticos y de seguimiento para garantizar que ciertos tintes o subproductos de tintes se hayan eliminado correctamente mediante la comparación de sus espectros a lo largo del tiempo. 23


La espectroscopia UV-Vis también es cualitativamente útil en algunas investigaciones más especializadas. El seguimiento de los cambios en la longitud de onda correspondiente al pico de absorbancia es útil para examinar cambios de proteínas estructurales específicas
24 , 25 , 26 y para determinar la composición de la batería. 27 Los cambios en las longitudes de onda máximas de absorbancia también pueden ser útiles en aplicaciones más modernas, como la caracterización de nanopartículas muy pequeñas. 28 , 29 Las aplicaciones de esta técnica son variadas y aparentemente infinitas.


Referencias


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